Elektroforeza: što je to, čemu služi i kako se to radi

Sadržaj

• Čemu služi
• Kako se to radi
• Vrste elektroforeze
• 1. Elektroforeza hemoglobina
• 2. Elektroforeza proteina

Elektroforeza je laboratorijska tehnika koja se izvodi s ciljem razdvajanja molekula prema njihovoj veličini i električnom naboju, tako da se može postaviti dijagnoza bolesti, provjeriti ekspresija proteina ili identificirati mikroorganizmi.

Elektroforeza je jednostavan i jeftin postupak koji se koristi u laboratorijskoj rutini i u istraživačkim projektima. Prema namjeni elektroforeze, možda će biti potrebno provesti druge testove i preglede kako bi se postigla dijagnoza, na primjer.

Čemu služi

Elektroforeza se može izvoditi u različite svrhe, kako u istraživačkim projektima, tako i u dijagnozi, jer je to jednostavna i jeftina tehnika.Dakle, elektroforeza se može izvesti na:

• Identificirajte viruse, gljivice, bakterije i parazite, s tim da je ova primjena češća u istraživačkim projektima;
• Test očinstva;
• Provjerite ekspresiju proteina;
• Identificirati mutacije, na primjer korisne u dijagnozi leukemije;
• Analizirati vrste cirkulirajućeg hemoglobina koji su korisni u dijagnozi anemije srpastih stanica;
• Procijenite količinu proteina prisutnih u krvi.

U skladu sa svrhom elektroforeze, možda će biti potrebno provesti druge komplementarne testove kako bi liječnik dovršio dijagnozu.

Kako se to radi

Za izvođenje elektroforeze potreban je gel, koji može biti poliakrilamid ili agaroza, ovisno o namjeni, pufer za elektroforezu i bačva, marker molekularne težine i fluorescentna boja, uz UV ili LED svjetlosnu opremu, poznatu i kao transilluminator.

Nakon pripreme gela, mora se postaviti određeni predmet tako da se jamice naprave u gelu, popularno zvanom češalj, i puste da gel stegne. Kad je gel spreman, samo nanesite tvari u jažice. Zbog toga se u jednu jažicu mora staviti marker molekularne težine, pozitivna kontrola, odnosno supstanca za koju se zna što je, negativna kontrola koja jamči valjanost reakcije i uzorci koji se analiziraju. Svi uzorci moraju se pomiješati s fluorescentnom bojom, jer je na taj način moguće vizualizirati trake na transilluminatoru.

Gel s uzorcima mora se staviti u posudu za elektroforezu koja sadrži određenu pufersku otopinu, a zatim se uređaj uključi tako da postoji električna struja i posljedično tome razlika potencijala, što je važno za odvajanje čestica prema njihovom opterećenje i veličina. Vrijeme elektroforetskog rada varira ovisno o cilju postupka i može trajati do 1 sata.

Nakon određenog vremena moguće je vidjeti rezultat elektroforetskog prolaska kroz transilluminator. Kada se gel stavi pod UV ili LED svjetlost, moguće je vizualizirati uzorak povezivanja: što je veća molekula, to je manja njena migracija, približavajući se jamici, dok je molekula lakša, veći je migracijski potencijal.

Da bi se reakcija potvrdila, moraju se vizualizirati pojasevi pozitivne kontrole, a u negativnoj kontroli se ne smije ništa vizualizirati, jer je u suprotnom pokazatelj da je došlo do onečišćenja i cijeli postupak mora biti ponovljen.

Vrste elektroforeze

Elektroforeza se može izvoditi u različite svrhe, a prema svojoj namjeni može se koristiti nekoliko vrsta gela, a najčešći su poliakrilamid i agaroza.

Elektroforeza za identificiranje mikroorganizama češće se provodi u istraživačkim laboratorijima, međutim, u dijagnostičke svrhe elektroforeza se može koristiti za identificiranje hematoloških bolesti i bolesti koje evoluiraju s povećanjem količine bjelančevina, a to su glavne vrste elektroforeze:

1. Elektroforeza hemoglobina

Elektroforeza hemoglobina laboratorijska je tehnika koja se izvodi radi identificiranja različitih vrsta hemoglobina koji cirkuliraju u krvi, što omogućava identificiranje prisutnosti bolesti povezanih sa sintezom hemoglobina. Vrsta hemoglobina identificira se elektroforezom pri određenom pH, idealno između 8,0 i 9,0, s uzorkom vrpci koji se mogu usporediti s normalnim uzorkom, što omogućuje identifikaciju abnormalnih hemoglobina.

Za što je stvoren: Elektroforeza hemoglobina provodi se za istraživanje i dijagnosticiranje bolesti povezanih sa sintezom hemoglobina, poput anemije srpastih stanica i bolesti hemoglobina C, osim što je korisna u razlikovanju talasemije. Saznajte kako protumačiti elektroforezu hemoglobina.

2. Elektroforeza proteina

Elektroforeza proteina ispit je koji liječnik zahtijeva kako bi procijenio količinu proteina koji cirkuliraju u krvi i, na taj način, utvrdio bolesti. Ovaj se pregled radi na uzorku krvi koji se centrifugira kako bi se dobila plazma, dio krvi koji se, između ostalih tvari, sastoji od proteina.

Nakon elektroforeze može se vizualizirati uzorak vrpci, a nakon toga i grafikon u kojem je naznačena količina svake frakcije proteina, što je osnovno za dijagnozu.

Za što je stvoren: Elektroforeza proteina omogućuje liječniku da istraži pojavu multiplog mijeloma, dehidracije, ciroze, upale, bolesti jetre, pankreatitisa, lupusa i hipertenzije prema uzorku traka i grafikonu predstavljenom u izvješću o pregledu.

Shvatite kako se to radi i kako razumjeti rezultat proteinske elektroforeze.